Susceptibilidad in vitro a cinco antifúngicos de aislamientos del Complejo Fusarium solani provenientes de úlceras corneales / In vitro susceptibility to five antifungals of Fusarium solani Complex isolates obtained from corneal ulcers

El Complejo Fusarium solani (CFS) se encuentra distribuido en la naturaleza, causando un amplio espectro de infecciones en los humanos, desde superficiales, como la queratitis, hasta infecciones fúngicas invasoras, caracterizándose por su resistencia a los antimicóticos. El objetivo de esta investigación fue determinar la susceptibilidad in vitro del CFS frente a cinco antifúngicos. Se utilizaron 30 aislados obtenidos de úlceras corneales provenientes de la colección de cultivos del Departamento de Micología del Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel” y se siguió el protocolo descrito en el documento M38-A2 del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI), determinando las Concentraciones Mínimas Inhibitorias (CMI) por microdilución en caldo para anfotericina B, itraconazol, posaconazol, voriconazol y fluconazol. En general, todas las drogas presentaron CMI elevadas, siendo voriconazol y anfotericina B los antifúngicos que exhibieron mejor actividad, mientras que itraconazol, posaconazol y fluconazol mostraron actividad nula. Los resultados de este estudio aportaron información importante sobre el comportamiento del CFS frente a los antifúngicos de uso común en la práctica clínica por primera vez en Venezuela. Es imprescindible que el médico conozca la actividad de estas drogas para poder tomar decisiones y orientar una conducta terapéutica adecuada.

The Fusarium solani Complex (FSC) is distributed in nature, producing a wide spectrum of infections in humans, from superficial ones such as keratitis, to invasive fungal infections, characterized by their resistance to antimycotics. The purpose of this investigation was to determine the in vitro susceptibility of the FSC to five antifungals. We used 30 isolates obtained from corneal ulcers kept at the culture collection of the Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel” and we followed the protocol described in the M38-A2 document of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) determining the Minimal Inhibitory Concentrations (MIC) by broth microdilution for amphotericin B, itraconazole, posaconazole, voriconazole and fluconazole. In general, all the drugs presented high MICs, voriconazole and amphotericin B being the antifungals which showed the best activity, while itraconazole, posaconazole and fluconazole showed a null activity. The results of this study provided, for the first time in Venezuela, important information about the behavior of the FSC towards commonly used antifungals. It is mandatory that physicians know the activity of these drugs in order to be able to take decisions and devise an guide an appropriate therapeutic management.

Validación del inóculo por densitometría para las pruebas de susceptibilidad a los antifúngicos en especies del género Fusarium / Validation of the inoculum by densitometry for antifungal susceptibility testing in Fusarium species

El objetivo de este trabajo fue validar la preparación del inóculo por densitometría para las pruebas de susceptibilidad a los antifúngicos en especies del género Fusarium. Se emplearon 15 aislamientos clínicos de Fusarium spp. para preparar los inóculos por espectrofotometría y contaje de unidades formadoras de colonias en cámara de Neubauer, siguiendo los protocolos establecidos por los documentos de referencia M38-A2 del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI) y E.DEF 9.1 del Comité Europeo para Pruebas de Susceptibilidad a los Antimicrobianos (EUCAST), respectivamente. En paralelo se determinaron las lecturas por densitometría para ambos procedimientos. Se estableció un rango de 0,5-0,7 unidades McFarland para la preparación del inóculo por densitometría según el CLSI, y un rango de 0,2-0,8 unidades McFarland para la metodología descrita por el EUCAST. Con este estudio, se logró validar la preparación del inóculo para las pruebas de susceptibilidad en Fusarium spp., utilizando la densitometría como método alternativo de los procedimientos descritos internacionalmente, con considerables ventajas para ser implementado en los laboratorios de microbiología clínica. La variabilidad en cuanto a la capacidad de esporulación y tamaño de las conidias, sobre todo en especies poco frecuentes de Fusarium, sugiere la necesidad de validar el inóculo por especie.

The purpose of this work was to validate the preparation of the inoculum by densitometry for antifungal susceptibility testing in Fusarium species. Fifteen clinical isolates of Fusarium spp. were used to prepare the inocula by spectrophotometry and counting of colony forming units in a Neubauer chamber, according to the protocols established by the reference documents M38-A2 of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), and E.DEF 9.1 of the European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST), respectively. Densitometry readings were determined in parallel for both procedures. A range of 0.5-0.7 McFarland units was established for inocula preparation by densitometry according to the CLSI, and a range of 0.2-0.8 McFarland units was established for the methodology described by EUCAST. This study allowed validating the preparation of the inocula for antifungal susceptibility testing in Fusarium spp., using densitometry as an alternative method for other procedures described internationally, with considerable advantages that can be implemented at clinical microbiology laboratories. The variability regarding sporulation capacity and conidia size, especially in less frequent Fusarium species, suggests the need of validating inocula per species.

Aislamiento y caracterización molecular, ribotipificación, de cepas nativas de Bacillus thuringiensis aisladas en suelos y larvas muertas de Hylesia metabus en la región nororiental de Venezuela / Isolation and molecular characterization, ribotyping, of Bacillus thuringiensis native strains isolated from soils and Hylesia metabus death larvae at northeast region of Venezuela

Bacillus thuringiensis es una bacteria esporogénica grampositiva del grupo B. cereus, caracterizada por la producción de δ-endotoxinas codificadas por una familia de genes cry, mayoritariamente plasmídicos con actividad patógena específica contra larvas de insectos. Esta propiedad ha sido usada en la formulación de productos comerciales para control de insectos plaga como Hylesia metabus “palometa peluda” que afecta a los pobladores de la región nororiental de Venezuela. En el Centro Venezolano de Colecciones de Microorganismos se ha iniciado la construcción de una colección de cepas nativas de B. thuringiensis, a partir de muestras de suelos y larvas muertas de H. metabus colectadas en zonas afectadas, que pudiera ser utilizada en la elaboración local de bioinsecticidas para control de ésta y otras plagas. El empleo de condiciones selectivas de crecimiento, pruebas bioquímicas complementarias y presencia de inclusiones parasporales, seguido de la caracterización molecular empleando la técnica de ribotipificación automatizada, permitió la identificación de 11 cepas nativas de B. thuringiensis. La variedad de ribotipos encontrados refleja la heterogeneidad genética de B. thuringiensis en la muestra examinada.

Bacillus thuringiensis is a Gram positive spore-forming bacteria of the B. cereus group, that produces δ-endotoxins, encoded mainly by cry genes, with pathogenic specific activity against some insect larvae. This property has been used in products applied to the control of Hylesia metabus, a pest known as “palometa peluda” that affects living population in the northeast region of Venezuela. In the Venezuelan Center for Culture Collections we have initiated the construction of a collection of B. thuringiensis native strains isolated from soils and H. metabus death larvae that could be applied in pest control. The use of selective growth conditions, biochemical tests and detection of parasporal inclusions, followed by ribotyping methods, allowed the identification of 11 B. thuringiensis native strains. Variety of ribotypes shows the genetic heterogeneity of B. thuringiensis identified.

Estandarización del inóculo por desintometría para las pruebas de susceptibilidad antifungica en especies de fusarium / Inoculum standadization by densitometry for the antifungal susceptibility testing of fusarium species

Las especies del género Fusarium han emergido como patógenos oportunistas en las últimas décadas. La aparición de cepas resistentes y la introducción de nuevos antifúngicos, hace necesaria la realización de las pruebas de susceptibilidad en los laboratorios de microbiología clínica. El objetivo de este estudio fue estandarizar la preparación del inóculo por densitometría para las pruebas de susceptibilidad a los antifúngicos en especies de Fusarium. Se utilizaron 15 aislamientos clínicos de Fusarium spp. y se prepararon los inóculos por espectrofotometría y por contaje de unidades formadoras de conidias en cámara de Neubauer, siguiendo los protocolos establecidos por el CLSI y EUCAST respectivamente, determinando en paralelo sus lecturas por densitometría para ambos procedimientos. Las lecturas densitométricas a través del uso del Densimat®, permitieron establecer un intervalo de 0,5 ­ 0,7 unidades Mc Farland para la preparación del inóculo por la metodología descrita por el CLSI y un rango de 0,2 ­ 0,8 unidades Mc Farland para la metodología según el EUCAST. Con este estudio, pionero en Venezuela, se logró estandarizar la preparación del inóculo óptimo en las pruebas de susceptibilidad para Fusarium spp. utilizando la densitometría como método alternativo, comparable y sustitutivo de los procedimientos descritos internacionalmente, con considerables ventajas (útil, disponible y reproducible) para ser implementado en los laboratorios de microbiología clínica. La variabilidad en cuanto a la capacidad de esporulación y tamaño de las conidias, sobre todo en las especies poco frecuentes de Fusarium, sugiere la necesidad de estandarizar el inóculo por especie.

Fusarium species have emerged like opportunistic pathogens in the last decades. The appearance of new resistant strains and the introduction of new antifungal agents, make necessary susceptibility tests in clinical microbiology laboratories. The objective of this study was to standardize inoculum preparation by densitometry for antifungal susceptibility testing in Fusarium species. Fifteen clinical isolates of Fusarium spp. were used, and the inocula were prepared by spectrophotometry and by conidia forming count in Neubauer chamber, following the establishment protocols of CLSI and EUCAST, respectively, determining in parallel their densitometry readings for both procedures. Densitometry readings by Densimat® allowed to establish an interval of 0.5 - 0.7 Mc Farland units for the inoculum preparation by the CLSI methodology, and a rank of 0.2 - 0.8 Mc Farland units for the methodology according to the EUCAST. With this study, pioneer in Venezuela, it was achieved the standardization of the optimal inoculums preparation for the susceptibility tests in Fusarium spp., using densitometry like an alternative, comparable and substitute method of the described internationally standard procedures, with considerable advantages (useful, available and reproducible) to be applied in clinical microbiology laboratories. The variability as far as both sporulation capability and conidia's size, mainly in less frequent species of Fusarium, suggests the needs to standardize the inoculums by species.